Obsah

• Hlavný rozdiel
• Southern Blotting vs. Western Blotting
• Porovnávacia tabuľka
• Čo je Southern Blotting?
• Čo je Western Blotting?
• Kľúčové rozdiely
• záver

Hlavný rozdiel

Hlavný rozdiel medzi Southern blottingom a Western blottingom je ten, že Southern Blotting je technika, ktorá sa používa na detekciu špecifického fragmentu DNA v danej vzorke, zatiaľ čo Western Blotting sa používa na nájdenie špecifického proteínu v danej vzorke.

Southern Blotting vs. Western Blotting

Blotovanie je technika, ktorú používajú vedci na oddelenie rôznych typov molekúl od zmesi alebo vzorky. V tejto technike sa makromolekuly ako nukleové kyseliny (DNA a RNA) a proteíny v zmesi pohybujú cez dosku gélu. Tu sa budú drobné častice pohybovať rýchlejšie ako tie väčšie. Tieto molekuly sú pritlačené na povrch imobilizovanej membrány, ktorá prenáša molekuly na membránu. Existujú rôzne typy blotovania na základe detekcie špecifického materiálu, t.j. Southern blotting, northern blotting a western blotting. Southern blotting je typ blotovania, ktorý sa používa na detekciu DNA, zatiaľ čo western blotting sa používa na zistenie proteínu. Southern blotting vyvinul Edward M. Southern v roku 1975. Je známy ako Southern blotting. Na druhej strane, Western blotting bol vyvinutý skupinou George Stark na Stanfordskej univerzite v roku 1979. Tento názov sa používal na porovnanie s južným blotovaním. Southern blotting sa používa na nájdenie špecifickej sekvencie DNA, zatiaľ čo western blotting sa používa na zistenie špecifickej aminokyselinovej alebo proteínovej sekvencie.

Porovnávacia tabuľka

Southern Blotting	Western Blotting
Technika, ktorá sa používa na nájdenie špecifickej sekvencie DNA v danej zmesi, je známa ako Southern blotting.	Technika, ktorá sa používa na nájdenie špecifickej aminokyselinovej sekvencie proteínu v danej zmesi, je známa ako Southern blotting.
Vyvinutý
Southern blotting vyvinul Edward M. Southern v roku 1975.	Western blotting bol vyvinutý skupinou George Stark na Stanfordskej univerzite v roku 1979.
Typ detekcie
Southern blotting sa používa na nájdenie špecifickej sekvencie DNA.	Western blotting sa používa na nájdenie špecifickej aminokyselinovej alebo proteínovej sekvencie.
zásada
Funguje na princípe hybridizácie.	Funguje na princípe imunodetekčnej metódy alebo interakcie antigén-protilátka.
sonda
Ako sonda sa používa jednovláknová DNA alebo niekedy RNA.	Ako sonda sa používajú primárne a sekundárne protilátky.
Gélová elektroforéza
Pri Southern blotting sa používa elektroforéza na agarózovom géli.	SDS PAGE / polyakrylamidový gél používaný na oddelenie proteínov pri westernovom prenose
Postup blokovania
Southern blotting nasleduje postup prenosu kapilár.	Western blotting nasleduje postup elektrického prenosu.
vzorka
Počas južného prenosu sa vzorka musí denaturovať.	Počas westernového prenosu by vzorka mala byť v pôvodnom stave.
blokovanie
Pri Southern blottingu sa nevykonáva žiadny krok, napríklad blokovanie.	Počas westernového prenosu sa na nitrocelulózovom papieri blokujú nešpecifické protilátkové miesta pomocou sušeného mlieka alebo hovädzieho sérového albumínu (BSA).
Metódy označovania
Bežné spôsoby označovania, ktoré sa používajú pri južnom prenose, sú použitie chromogénnych farbív alebo rádioaktívneho značenia alebo fluorescenčného značenia atď.	Metódy označovania používané pri westernovom prenose sú použitie fluorescenčne značenej protilátky alebo rádioaktívneho značenia, chromogénnych farbív alebo tvorby diaminobenzidínu atď.
Metódy detekcie
Detekcia svetla, autorádiograf a zmeny farby sa používajú ako metódy detekcie pri južnom prenose.	Metódy detekcie pri westernovom prenose sú zmeny farby a detekcie svetla atď.
prihláška
Southern blotting sa používa na detekciu DNA, testovanie otcovstva, prstoklad DNA, na identifikáciu obete, na identifikáciu zločincov, na nájdenie infekčných agens a na identifikáciu mutácie alebo preskupenia génov, atď.	Western blotting sa používa na zistenie počtu proteínov v zmesi, na detekciu prítomnosti HIV, vírusov a baktérií atď. V sére, na zistenie defektných proteínov a používa sa ako definitívne opatrenie pri opare, hepatitíde B, Lyme. choroba a Creutzfeldt-Jacobova choroba atď.

Čo je Southern Blotting?

Southern blotting je najstaršia metóda, ktorá bola poskytnutá Edwinom Southernom, pomenovaná ako Southern blotting. Používa sa na zistenie špecifickej sekvencie DNA v danej vzorke alebo zmesi. Kroky zahŕňajú počas Southern blotting elektroforézu, prenos a detekciu špecifických sekvencií. DNA sa najprv fragmentuje pomocou špecifického reštrikčného enzýmu. Potom sa požadované fragmenty DNA separujú gélovou elektroforézou. Tieto fragmenty sa denaturujú pomocou alkalického roztoku, napríklad NaOH, atď., Aby sa oddelili dva reťazce DNA. Tieto jednovláknové DNA fragmenty sa potom preniesli na membránu procesom blotovania. Na túto membránovo viazanú DNA sa potom pôsobí značenou sondou. Táto sonda sa pripojí k svojmu komplementárnemu vláknu na membránovej DNA, ktorú je možné vizualizovať autorádiogramom atď.

Čo je Western Blotting?

Metóda Western blot bola vynájdená skupinou Georga Starka na Stanfordskej univerzite, ktorá sa používa na identifikáciu špecifickej sekvencie aminokyselín v proteíne. Je tiež známy ako proteín blot alebo imunitný blot. Kroky počas westernového prenosu sú elektroforéza, prenos a detekcia špecifických proteínov. Najskôr homogenizujte zmes. Potom pomocou elektroforézy oddeľujte požadovanú molekulu. Preneste tieto molekuly na membránu a pomocou špecifickej sondy identifikujte špecifický proteín.

Kľúčové rozdiely

1. Technika, ktorá sa používa na nájdenie špecifickej sekvencie DNA v danej zmesi, je známa ako Southern blotting, zatiaľ čo technika, ktorá sa používa na nájdenie špecifickej aminokyselinovej sekvencie proteínu v danej zmesi, je známa ako Southern blotting.
2. Southern blotting bol vyvinutý Edwardom M. Southernom v roku 1975, známym ako Southern blotting. Na druhej strane, Western Blotting bol vyvinutý skupinou George Stark na Stanfordskej univerzite v roku 1979.
3. Southern blotting sa používa na nájdenie špecifickej sekvencie DNA. Naopak, Western blotting sa používa na nájdenie špecifickej aminokyselinovej alebo proteínovej sekvencie.
4. Southern blotting funguje na princípe hybridizácie na druhej strane; Western blotting funguje na princípe imunodetekčnej metódy alebo interakcie antigén-protilátka.
5. Jednovláknová DNA alebo niekedy RNA sa používa ako sonda pri Southern blottingu na druhej strane, v western blottingu sa primárne a sekundárne protilátky používajú ako sonda.
6. Elektroforéza na agarózovom géli sa používa pri južnom blotovaní, zatiaľ čo SDS PAGE / polyakrylamidový gél sa používa na oddelenie proteínov pri westernovom prenose.
7. Na druhej strane Southern blotting nasleduje postup prenosu kapilár; Western Blotting postupuje podľa postupu elektrického prenosu.
8. Počas Southern blottingu musí byť vzorka denaturovaná, zatiaľ čo počas westernového prenosu musí byť vzorka v pôvodnom stave.
9. Žiadny krok, ako je blokovanie, sa nezúčastňuje na južnom vymývaní na druhej strane, počas westernového prenosu sa miesta nešpecifických protilátok blokujú na nitrocelulózovom papieri pomocou sušeného mlieka alebo hovädzieho sérového albumínu (BSA).
10. Bežné spôsoby značenia, ktoré sa používajú pri južnom blotovaní, sú použitie chromogénnych farbív alebo rádioaktívneho značenia alebo fluorescenčného značenia atď., Zatiaľ čo spôsoby značenia používané pri westernovom prenose sú použitie fluorescenčne značenej protilátky alebo rádioaktívneho značenia, chromogénnych farbív alebo tvorby diaminobenzidínu atď.
11. Detekcia svetla, autorádiograf a zmeny farby sa používajú ako metódy detekcie pri južnom prenose, zatiaľ čo metódami zisťovania pri westernovom prenose sú zmeny farby a detekcia svetla atď.
12. Southern blotting sa používa na detekciu DNA, testovanie otcovstva, prstoklad DNA, na identifikáciu obete, na identifikáciu zločincov, na nájdenie infekčných agensov a na identifikáciu mutácie alebo preskupenia génov atď. Naopak, westernový prenos sa používa na zistenie počtu proteínov v zmes, na detekciu prítomnosti HIV, vírusov a baktérií atď. v sére, na zistenie defektných proteínov a použitých ako definitívne opatrenie pri opare, hepatitíde B, lymskej chorobe a Creutzfeldt-Jacobovej chorobe atď.

záver

Vyššie uvedená diskusia sumarizuje, že Southern blotting je najstaršia technika blotovania použitá na nájdenie špecifického segmentu DNA vo vzorke, zatiaľ čo western blotting bol objavený neskôr a použitý na identifikáciu špecifickej sekvencie aminokyselín alebo špecifického proteínu.